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???metadata.dc.type???: Dissertação
Title: Produção de antígenos recombinantes de regiões polimórficas e conservada da “proteína 1” de superfície de merozoíto de plasmodium vivax e caracterização da resposta imune humoral em indivíduos expostos a malária no Amazonas
???metadata.dc.creator???: Almeida, Maria Edilene Martins de. 
???metadata.dc.contributor.advisor1???: Mariúba, Luís André Morais
First advisor-co: Nogueira, Paulo Afonso
???metadata.dc.description.resumo???: Introdução: A malária é um problema de saúde pública amplamente distribuída nas regiões tropicais e subtropicais no mundo. No Brasil, a doença ainda apresenta elevados números de casos, no qual o Plasmodium vivax (P. vivax) é responsável pela maior parte de diagnóstico. Nos últimos anos, esses casos vêm se apresentando de forma complicada, tornando-se este um motivo de preocupação, pois está espécie apresenta ampla distribuição geográfica, dessa maneira torna-se necessário o controle da infecção. Uma das alternativas para controle da infecção seria o desenvolvimento de uma vacina. No entanto, um dos grandes problemas para seu desenvolvimento é a incompreensão das respostas imunológicas contra os antígenos candidatos. Dentre os antígenos candidatos, a “proteína 1” de superfície do merozoíto (MSP-1) de Plasmodium tem se destacado, pois estudos demonstram que anticorpos contra as diferentes regiões de MSP-1 conferem proteção clínica em indivíduos que residem em áreas endêmicas. O objetivo desta trabalho foi caracterizar a resposta imune humoral contra antígenos recombinantes de regiões variavéis e conservada da PvMSP-1 em indivíduos que residem em áreas endemicas no estado do Amazonas. Material e métodos: Para tanto, foram produzidas três proteínas recombinantes, duas correspondente a região variável (bloco 2) e uma da conservada (bloco do ICB1) da PvMSP-1 (utilizando sequencias identificadas em trabalhadores anteriores, e selecionadas por bioinformática como os epítopos de células B). Tais proteínas foram expressas e purificadas utilizando genes sintéticos otimizados para expressão em Escherichia coli. A reatividade de soros de pacientes sintomáticos e assintomáticos contra estas proteínas, juntamente com a proteína ICB2-5 de PvMSP-1 (obtida em trabalhos anteriores), foi avaliada por ELISA indireto. Resultados e Conclusão: A expressão e purificação das proteínas recombinantes foram realizadas com êxito. A análise sorológica contra os antígenos recombinantes demonstrou maior nível de anticorpos contra a proteína ICB2-5 para ambas as aéreas (Rio Pardo e Manaus). Em relação à resposta de anticorpos IgG contra às três proteínas (P1, P2 e P3), foi observado que a proteína P2 foi a mais reconhecida nos soros de pacientes sintomáticos de Manaus e Rio Pardo, enquanto que a P3 foi a mais reconhecida nos assintomáticos. Em análise a resposta de subclasses observou-se que o IgG3 foi o mais prevalente contra ICB2-5. Em relação às três proteínas o nível de reatividade foi baixo para as subclasses, porém quando as frequências de soros respondedores IgG3 e IgG2 foram reunidas in silico(ICB2- 5+P1+P2+P3). Estas superaram os resultados nos níveis de reconhecimento da ICB2-5 sozinha, sugerindo que o desenvolvimento de um repertório de proteínas recombinantes correspondentes ao Bloco 2 é capaz de expandir o espectro de soros reagentes.
Abstract: Introduction: Malaria is a public health issue distributed in tropical and subtropical regions worldwide. In Brazil, the disease still has a high number of cases in which Plasmodium vivax (P. vivax) is responsible for most of diagnosis. Lately, these cases have been performing so complicated that becomes a matter of concern because the species has a wide geographic distribution, and there is a need to control the infection. One alternative for infection control would be the development of a vaccine. However, a major problem for its development is the lack of understanding of the immune response against the antigen candidates. Among the candidate antigens, the Protein 1 Merozoite Surface (MSP-1) of Plasmodium has excelled, because studies show that antibodies against different regions of MSP-1 confer clinical protection in individuals living in endemic areas. The aim of this study was to characterize the humoral immune response against the recombinant antigen of conserved and variable regions of PvMSP-1 in individuals living in endemic areas in the state of Amazonas. Methods: For this purpose, we produced three recombinant proteins, two corresponding to the variable region (block 2) and the conserved (block ICB1) of PvMSP-1 (using sequences identified by previous workers, and selected by bioinformatics as epitopes B cell). The proteins were expressed and purified using synthetic genes optimized for expression in Escherichia coli. The serum reactivity from symptomatic and asymptomatic patients against the proteins was evaluated by ELISA, along with protein ICB2 PvMSP-5-1 (obtained in previous work. Results and Conclusion: The expression and purification of recombinant proteins were performed successfully. The serological analysis against recombinant antigens showed a higher level of antibodies against the protein ICB2-5 for both groups (Rio Pardo and Manaus). Regarding IgG antibody response against the three proteins (P1, P2 and P3), it was observed that the P2 protein was recognized in the serum of most patients symptomatic of Manaus and Rio Pardo, whereas P3 has been the most recognized in asymptomatic . The subclasses analysis showed that the IgG3 was the most prevalent against ICB2-5. The level of reactivity was low to subclasses for all proteins, but when the frequencies of serum IgG2 and IgG3 responders were assembled in silico (ICB2-5 + P1 + P2 + P3). These results recognition level overcame ICB2-5 alone, suggesting that the development of the repertoire of recombinant proteins corresponding to block 2 is capable to expand the spectrum of reactive serum.
Keywords: Malária
Plasmodium vivax
Resposta imune
Malaria
Plasmodium vivax
Immune response
???metadata.dc.subject.cnpq???: CIÊNCIAS BIOLÓGICAS: IMUNOLOGIA
Language: por
???metadata.dc.publisher.country???: Brasil
Publisher: Universidade Federal do Amazonas
???metadata.dc.publisher.initials???: UFAM
???metadata.dc.publisher.department???: Instituto de Ciências Biológicas
???metadata.dc.publisher.program???: Programa de Pós-graduação em Imunologia Básica e Aplicada
Citation: ALMEIDA, Maria Edilene Martins. Produção de antígenos recombinantes de regiões polimórficas e conservada da “proteína 1” de superfície de merozoíto de plasmodium vivax e caracterização da resposta imune humoral em indivíduos expostos a malária no Amazonas. 2013. 112 f. Dissertação (Mestrado em Imunologia Básica e Aplicada) - Universidade Federal do Amazonas, Manaus, 2013.
???metadata.dc.rights???: Acesso Aberto
URI: http://tede.ufam.edu.br/handle/tede/5192
Issue Date: 25-Apr-2013
Appears in Collections:Mestrado em Imunologia Básica e Aplicada

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