@MASTERSTHESIS{ 2021:170673290, title = {Express?o end?gena do horm?nio do crescimento de tambaqui (Colossoma macropomum) em Pichia pastoris}, year = {2021}, url = "https://tede.ufam.edu.br/handle/tede/8319", abstract = "Na regi?o norte, onde h? o maior consumo de pescado, o tambaqui (Colossoma macropomum) ? o peixe mais consumido. Para possibilitar o aumento da produ??o do tambaqui, ? necess?rio compreens?o sobre a fisiologia, ecologia, dentre outros conhecimentos, para uma otimiza??o e padroniza??o de tecnologias a serem aplicadas na produ??o desse peixe. Recentemente, o cDNA do horm?nio de crescimento de tambaqui foi constru?do por s?ntese qu?mica e expresso em P. pastoris sob o controle do promotor pAOX1 dessa levedura. Considerando a toxicidade do indutor deste promotor, este trabalho tem como principal objetivo a express?o heter?loga intracelular do horm?nio de crescimento de tambaqui (rtGH) na levedura Pichia pastoris, utilizando um promotor constitutivo, o pPGK1. Foram constru?dos dois vetores para express?o de rtGH, sendo que esses vetores foram linearizados e integrados no genoma de P. pastoris linhagem M12 (auxotr?fica para o amino?cido leucina). Os clones transformantes foram selecionados inicialmente no meio seletivo MD seguido de uma segunda sele??o por crescimento em meio MD com o antibi?tico G418. Para confirma??o das col?nias transformantes, foi realizado identifica??o do gene rtGH por meio de PCR, enquanto a confirma??o da express?o intracelular da prote?na foi realizada por imunodot e SDS-PAGE/Western Blotting. Como a express?o do tGH ocorreu em n?veis baixos, esfor?os dever?o ser realizados no sentido de se identificar a raz?o da baixa produ??o, para que se possa obter a express?o do horm?nio em n?veis em que se possa utilizar a levedura recombinante para suplementa??o de ra??o para peixes.", publisher = {Universidade Federal do Amazonas}, scholl = {Programa de P?s-Gradua??o em Biotecnologia}, note = {Instituto de Ci?ncias Biol?gicas} }