@MASTERSTHESIS{ 2025:1445347290,
 	title = {Produção, purificação e caracterização bioquímica de Pleurotus pulmonarius (Pleurotaceae)},
 	year = {2025},
 	url = "https://tede.ufam.edu.br/handle/tede/11049",
 	abstract = "Dentre as doenças cardiovasculares (DCV), a trombose representa 30% dos 
 70% dos óbitos globais e são oriundas da formação e/ou desenvolvimento de 
 coágulos sanguíneos em veias e artérias pelo acumulo de fibrina. As proteases com 
 ação fibrinolítica dissolvem os coágulos mediante a ativação da plasmina. Dentre 
 as mais variadas fontes de obtenção destas enzimas, os cogumelos comestíveis 
 pertencentes ao gênero Pleurotus sp. se destacam como produtores de enzimas 
 com potencial biotecnológico. O objetivo desse trabalho consistiu, inicialmente, em 
 detectar e quantificar, dentre diferentes meios e métodos de cultivo, a produção de 
 proteases fibrinolíticas, avaliar o nível de citotoxidade dos extratos obtidos, purificar 
 e determinar o tamanho molecular e caracterizar bioquimicamente o extrato 
 selecionado. Para tal, quatro resíduos de frutas amazônicas, três produtos 
 alimentares e três meios de cultivo sintéticos foram utilizados para obtenção das 
 proteases. Em todos os substratos avaliados foi detectado a produção de proteases 
 com ação fibrinolíticas. Os meios de cultivo com maior teor de atividade fibrinolítica, 
 foram: o resíduo borra de café – PPBB, 97,71 U/mL, o farelo de aveia - PPFA, 
 168,31 U/mL e o meio de cultivo sintético Extrato de Malte – PPEM, 173,20 U/mL.  
 Em seguida, todos os extratos de P. pulmonarius foram submetidos a análise de 
 toxicidade utilizando células de linhagens de fibroblastos humano (MRC-5) por 72 
 horas. Dentre os 10 substratos analisados, 2 substratos apresentaram alterações 
 morfológicas quando comparadas ao controle negativo (DMSO). PPEM foi, então, 
 liofilizado e semipurificado. Das 21 frações coletadas, a fração 1G11 apresentou 
 maior atividade proteolítica e fibrinolítica específica. Esta fração foi então, reinjetada 
 em sistema AKTA Avant sob as mesmas condições iniciais, obtendo um único pico 
 ativo com 51% de recuperação de proteases e 5,94 vezes de purificação (atividade 
 específica de 70,24 U / mL). Nas condições experimentais utilizadas, esta fração 
 apresentou duas bandas distintas com peso molecular de 48 e 63 KDa, 
 respectivamente, via SDS-PAGE, sugerindo fração enzimática homogênea sob 
 condições não redutoras, apresentou atividade ótima em pH 8,0, a 50 °C, sendo 
 classificada como metaloprotease, zinco e cálcio dependente e inibição parcial da 
 atividade na presença de metanol, isopropanol, acetona, butanol, acetonitrila, 
 DMSO, Triton X 100 e CTAB. A ação destes biocatalisadores foi inibida pela 
 presença de Fe+2. Desta forma foi possível concluir que a espécie de cogumelo 
 comestível P. pulmonarius produziu proteases com ação fibrinolítica em ambos os 
 métodos de cultivo avaliados demostrando o potencial biotecnológico desta espécie 
 de cogumelo na produção de proteases com ação fibrinolítica. 
 Palavras-chave: Trombose, resíduos, meios de cultivo, proteases.",
 	publisher = {Universidade Federal do Amazonas},
 	scholl = {Programa de Pós-graduação em Ciências Farmacêuticas},
 	note = {Faculdade de Ciências Farmacêuticas}
}