@MASTERSTHESIS{ 2025:1136067074,
 	title = {Diagnóstico de Esporotricose: Reações de Detecção (PCR) e Diferenciação (PCR- RFLP) de Espécies de Sporothrix spp.},
 	year = {2025},
 	url = "https://tede.ufam.edu.br/handle/tede/11129",
 	abstract = "A esporotricose é uma micose subcutânea emergente de relevância na região Amazônica, com
 aumento expressivo de casos em humanos e felinos. A identificação rápida e precisa dos agentes
 etiológicos é essencial para o manejo clínico e a vigilância epidemiológica. Este estudo teve
 como objetivo aprimorar o diagnóstico molecular da esporotricose, avaliando diferentes
 métodos de extração de DNA e comparando a sensibilidade de três regiões-alvo do DNA
 ribossomal (ITS, ITS/LSU e D1/D2 do 28S) para amplificação por PCR. Três protocolos de
 extração de DNA (fenol-clorofórmio, colunas de sílica e precipitação por sal) foram aplicados
 a isolados de Sporothrix brasiliensis, S. schenckii, um isolado regional de Sporothrix spp., além
 
 de Candida albicans e Aspergillus niger como controles externos. O método de fenol-
 clorofórmio apresentou maior rendimento e pureza de DNA. Os primers ITS1–ITS4 foram os
 
 mais sensíveis, detectando até 0,0002 ng de DNA, seguidos por NL1–NL4 (0,002 ng) e ITS5–
 NL4 (0,02 ng). Uma análise in silico avaliou cinco enzimas de restrição (HaeIII, MspI, HinfI,
 DdeI e RsaI), mas os perfis de fragmentação gerados pelas diferentes espécies de Sporothrix
 apresentaram tamanhos muito semelhantes, com diferenças menores que 20 pb, dificultando a
 diferenciação prática por PCR-RFLP. Experimentalmente, a PCR-RFLP permitiu distinguir os
 isolados de Sporothrix dos fungos não relacionados (C. albicans e A. niger), mas não foi eficaz
 para diferenciar entre S. brasiliensis e S. schenckii. A análise filogenética baseada na região ITS
 confirmou que todos os isolados clínicos de Manaus pertenciam ao clado de S. brasiliensis.
 Conclui-se que a combinação da extração por fenol-clorofórmio e PCR com primers ITS1–
 ITS4 representa uma alternativa sensível e acessível para o diagnóstico da esporotricose na
 região Amazônica.",
 	publisher = {Universidade Federal do Amazonas},
 	scholl = {Programa de Pós-graduação em Ciências Farmacêuticas},
 	note = {Faculdade de Ciências Farmacêuticas}
}