@MASTERSTHESIS{ 2009:1786892042, title = {Identifica??o molecular e produ??o de enzimas celulol?ticas por Trichoderma spp}, year = {2009}, url = "http://tede.ufam.edu.br/handle/tede/2254", abstract = "Trichoderma s?o fungos anam?rficos pertencentes ? classe dos hifomicetos, tamb?m chamados fungos imperfeitos, assexuais ou conidiais e que t?m como teleomorfo o g?nero Hypocrea. S?o fungos de vida livre, distribu?dos em todo o mundo e encontrados em solos de diversas temperaturas, especialmente naqueles que cont?m mat?ria org?nica. Geralmente n?o s?o considerados importantes pat?genos humanos, mas existem alguns relatos indicando patogenicidade ocasional em algumas esp?cies. Sua f?cil manipula??o e cultivo in vitro, estabilidade e viabilidade das col?nias preservadas, fazem desse g?nero um grande alvo para as pesquisas biotecnol?gicas. Por tais caracter?sticas, foram isolados Trichoderma das plantas Victoria amazonica, Rollinia sp., Murraya paniculata e Strychnos cogens; da madeira Scleronema micranthum, conhecida como cardeiro; de jatob? (Hymenaea courbaril), do solo de cultura de cubiu (Solanum sessiliflorum) e de terra preta de ?ndio, com o objetivo de identificar, pela biologia molecular, em n?vel de esp?cie, tais isolados, bem como avaliar sua capacidade de produ??o de enzimas celulol?ticas. Das 30 linhagens obtidas foram realizadas culturas monosp?ricas, as quais foram preservadas em ?leo mineral, m?todo Castellani e em glicerol 10%. A partir da suspens?o em glicerol, de cada amostra foi inoculado 10?L em 20mL de BD e cultivado a 26oC, a 100 rpm por 40:00h. Em seguida foi extra?do o DNA gen?mico, deste realizada a PCR espec?fica para as regi?es ITS-1 e ITS-2 do DNA riboss?mico e posteriormente o sequenciamento. Para a produ??o de enzimas, os isolados foram previamente cultivados em meio indutor. Foram inoculados 10?L da solu??o de esporos (Glicerol 10%) em 50mL de solu??o de Manachini onde o substrato indutor utilizado foi a carboximetilcelulose. Os fungos foram incubados a 27?C, 120 rpm durante 120 horas. A dosagem de CMCase foi efetuada com base no m?todo do ?cido Dinitrosalic?lico. Para a dosagem de ?-glucosidase foi utilizado o pnitrofenil- ?-D-Glucopiranos?deo (pNPG) como substrato para a enzima. A concentra??o de prote?nas totais foi determinada pelo m?todo de Bradford, utilizando-se o reagente concentrado comercial da Bio-RadTM e albumina de soro bovino (ASB), como padr?o. O resultado da identifica??o molecular das primeiras 13 amostras nos revelaram as esp?cies: T. harzianum, T. koningii, T. asperellum, T. viride, T. ovaslisporum, T. hamatum, T. piluliferum e T. koningiopsis, com um percentual entre 96 e 99% de identidade e 100% de confiabilidade. Os resultados enzim?ticos para CMCase indicaram valores baixos, inferiores a 0,100 U/mL com exce??o de T. koningii (MPCe 10 3.2), T. harzianum (MPCe 2 2.2a), ambos isolados de M. paniculata, e o isolado 1437 identificado como Trichoderma sp., proveniente de terra preta de ?ndio, que apresentaram valores um pouco mais altos de 0,112 e 0,103 e 0,105 U/mL, respectivamente. Para ?-glucosidase, os resultados apresentados mostraram alta atividade na grande maioria dos isolados com destaque para T. harzianum MPCe 3 3.1(10,45U/mL) e T. piluliferum Vrc 2 3.2 (9,71 U/mL). Todos os isolados produziram prote?nas em meio de cultura contendo carboximetilcelulose como substrato indutor", publisher = {Universidade Federal do Amazonas}, scholl = {Programa de P?s-Gradua??o em Biotecnologia}, note = {Instituto de Ci?ncias Biol?gicas} }