@PHDTHESIS{ 2015:935512357,
 	title = {Produ??o de proinsulina recombinante em Pichia pastoris utilizando o promotor do gene PGK},
 	year = {2015},
 	url = "http://tede.ufam.edu.br/handle/tede/5228",
 	abstract = "De acordo com os indicadores da Organiza??o Mundial de Sa?de (OMS) o diabetes mellitus deve alcan?ar 333 milh?es de pessoas em 2025 no mundo e em 2030 na Am?rica Latina ser? a segunda causa de morte, por isso o aumento da produ??o de insulina torna-se uma necessidade para suprir as futuras demandas de mercado. Os sistemas de express?o em leveduras tipo Pichia pastoris tem sido cada vez mais utilizados e tem-se mostrado como atraentes alternativas para a express?o de prote?nas para fins industriais. Dessa forma, este trabalho tem como objetivo principal a produ??o de proinsulina humana por Pichia pastoris utilizando o promotor do gene PGK. O gene A1 que codifica o precursor da insulina foi sintetizado quimicamente com cod?ns otimizados para a express?o em P. pastoris. Esse gene foi clonado em vetor de express?o/secre??o sob controle do promotor PGK de P. pastoris e integrado no genoma de P. pastoris GS115. A produ??o de proinsulina recombinante foi realizada em meio l?quido YPD em frascos agitados a 30?C, a 180 rpm. A an?lise da proinsulina expressa em P. pastoris foi realizada por eletroforese em gel desnaturante de poliacrilamida e Western-blotting e mostrou massa molecular de aproximadamente 7,5 kDa. O clone recombinante A140 que apresentou maior resist?ncia a zeocina e sinal positivo mais intenso no imunodot-blotting foi utilizado para estabelecer condi??es melhores de express?o/secre??o de proinsulina em planejamento fatorial estat?stico experimental. As condi??es de cultivo que se mostraram melhores para a produ??o da proinsulina foram: composi??o do meio de cultivo (dextrose 7,5%, extrato de levedura 1% e peptona 0,15%), temperatura de 25?C e pH do meio igual a 7,0. O clone A140 nas melhores condi??es de cultivo atingiu biomassa total de 50g/L e n?vel de express?o de insulina de 0,83g/L em 72 horas de cultivo. A express?o de proinsulina em altos n?veis utilizando o promotor PGK em P. pastoris faz esse sistema de express?o atrativo para produ??o da proinsulina humana e outras prote?nas de interesse industrial.",
 	publisher = {Universidade Federal do Amazonas},
 	scholl = {Programa de P?s-Gradua??o em Biotecnologia},
 	note = {Instituto de Ci?ncias Biol?gicas}
}