@PHDTHESIS{ 2014:769552479,
 	title = {Express?o e caracteriza??o de trealose-6-fosfato fosfatase de Anopheles gambiae produzida em Pichia pastoris},
 	year = {2014},
 	url = "http://tede.ufam.edu.br/handle/tede/5350",
 	abstract = "A mal?ria humana por ser uma doen?a tropical e parasit?ria de relev?ncia m?dica,
 social e econ?mica, representa um dos mais importantes problemas de sa?de
 p?blica no mundo. Em vista ? resist?ncia do inseto-vetor aos inseticidas, a pesquisa
 de novas ferramentas para o controle do vetor tem sido proposta. Uma das
 alternativas mais fascinantes baseia-se no uso de inibidores de enzimas que
 desempenham papel importante e fundamental no metabolismo e fisiologia do
 inseto. Uma destas enzimas ? a trealose-6-fosfato fosfatase atuante na rota
 metab?lica da trealose que desfosforila a mol?cula de trealose-6-fosfato, formando
 como produtos o dissacar?deo trealose e fosfato inorg?nico. A trealose ? um d?mero
 de glicose encontrado em plantas, insetos e micro-organismos. Nestes organismos
 acredita-se ser importante para diversos pap?is, um dos quais ? servir como s?tio de
 armazenamento de glicose para energia e/ou para a s?ntese de componentes
 celulares, outro papel ? proteger as c?lulas contra press?es ambientais, tais como
 desseca??o e congelamento, e para estabiliza??o de prote?nas contra a
 desnatura??o. Por esse motivo, este trabalho teve como objetivo clonar e expressar
 o gene da trealose-6-fosfato fosfatase (TPP) de Anopheles gambiae na levedura
 metilotr?fica Pichia pastoris e analisar a enzima recombinante expressa na levedura.
 De acordo com os resultados obtidos, foi poss?vel demonstrar que a enzima TPP de
 A. gambiae foi expressa eficazmente na levedura P. pastoris e secretada no
 sobrenadante da cultura celular, conforme an?lise por Western blotting. Pelo perfil
 eletrofor?tico em gel SDS-PAGE, ap?s procedimento de purifica??o, foi revelado que
 a enzima TPP recombinante do clone TPP 61 tem massa molecular de ~36 kDa. A
 caracteriza??o da enzima apresentou pH ?timo de 8,0 e temperatura ?tima de 38 ?C.
 As constantes cin?ticas da enzima indicaram um KM de 3,19 ? 0,10 mM e Vm?x de
 290,0 ? 3,78 ?mol.min-1. A an?lise de vari?ncia (ANOVA) com dois fatores revelou
 inibi??o significativa da TPP recombinante para EDTA (p <0,0001), NaF (p <0,0001),
 CaCl2 (p <0,001) e Ca(NO3)2 (p <0,0001) na concentra??o de 25 mM, enquanto que
 na concentra??o de 5 mM os compostos CaCl2 (p <0,001) e Ca(NO3)2 (p <0,05)
 foram significativos na inibi??o da enzima.",
 	publisher = {Universidade Federal do Amazonas},
 	scholl = {Programa de P?s-Gradua??o em Biotecnologia},
 	note = {Instituto de Ci?ncias Biol?gicas}
}