@MASTERSTHESIS{ 2016:1336358933,
 	title = {Clonagem e express?o da prote?na do caps?deo do v?rus Chikungunya para produ??o de ant?geno recombinante: Produ??o de ant?geno recombinante atrav?s de gene sint?tico do v?rus Chikungunya},
 	year = {2016},
 	url = "http://tede.ufam.edu.br/handle/tede/5951",
 	abstract = "O v?rus Chikungunya (CHIKV) ? um v?rus de RNA (fam?lia Togaviridae, g?nero Alphavirus), transmitido aos seres humanos atrav?s da picada de mosquitos f?meas de Aedes aegypti e Aedes albopictus. O in?cio das manifesta??es cl?nicas da infec??o por CHIKV na maioria das vezes ? caracterizada por febre e dor nas articula??es, e at? agora n?o existe uma terapia antiviral espec?fico ou vacina para o tratamento da infec??o. O diagn?stico da infec??o CHIKV ? baseado em achados cl?nicos e laboratoriais, com o ?ltimo sendo realizada por isolamento do v?rus, transcri??o reversa-polimerase rea??o em cadeia (RT-PCR), sorologia e testes r?pidos. Para produzir um ant?geno recombinante atrav?s da clonagem e express?o da prote?na do caps?deo (C) de CHIKV de modo a detectar anticorpos anti-CHIKV em amostras de soro humano, por ensaio imunoenzim?tico. Um gene sint?tico (gBlock), especificamente concebidos para esse estudo, correspondente ? prote?na C do caps?deo (400 pares de bases) do v?rus Chikungunya, foi amplificado por rea??o em cadeia da polimerase (PCR) e, em seguida, clonado em pGEM-T Easy sistema de Escherichia coli. Os clones transformantes foram sequenciados, e os produtos recombinantes foram digeridos com as endonucleases de restri??o EcoRI e BamHI, e depois subclonado e expresso no vector pET-23a+ e Escherichia coli BL21 (DE3). A express?o da prote?na C recombinante e o peso molecular foram determinados por SDS-PAGE e Dot Blot e purificado por cromatografia de afinidade utilizando uma coluna de n?quel. Um ensaio imunoenzim?tico foi realizada utilizando o ant?geno recombinante para detec??o de anticorpos IgM e IgG em soros de pacientes com infec??o CHIKV confirmados pelo laborat?rio nacional de refer?ncia do Minist?rio da Sa?de, bem como soros de pacientes positivos para o v?rus Mayaro, v?rus da dengue e citomegalov?rus infec??o. O derivado da prote?na recombinante mostrou tamanho e antigenicidade compat?vel com a prote?na C nativa do CHIKV; uma concentra??o de 0,342 ng / mL de prote?na C recombinante foi obtido utilizando o pET-23a+ de E. coli BL21 (DE3); a cromatografia de afinidade utilizando uma coluna de n?quel foi eficaz para obter a prote?na C sol?vel, confirmada pelo m?todo de Bradford; o ensaio imunoenzim?tico utilizando o ant?geno recombinante mostrou reatividade cruzada com outros agentes patog?nicos de Aphav?rus. Os resultados indicam que o sistema de express?o pET-23a+ de E. coli BL21 (DE3) foi eficaz para produzir a prote?na C recombinante de CHIKV, no entanto, o ant?geno n?o foi suficientemente sens?vel para detectar apenas a infec??o CHIKV.",
 	publisher = {Universidade Federal do Amazonas},
 	scholl = {Programa de P?s-Gradua??o em Biotecnologia},
 	note = {Instituto de Ci?ncias Biol?gicas}
}