@PHDTHESIS{ 2018:558730995, title = {Estudo da alfa amilase de Bacillus koreensis isolado de ecossistema aqu?tico da Amaz?nia: clonagem molecular, express?o e caracteriza??o}, year = {2018}, url = "https://tede.ufam.edu.br/handle/tede/6674", abstract = "A regi?o amaz?nica possui uma imensa Biodiversidade de ecossistemas aqu?ticos do planeta e v?rias vias bioqu?micas nestes ecossistemas aqu?ticos, atuando na reciclagem do carbono org?nico, tal como, a alfa amilase. Para isto, o objetivo deste trabalho foi isolar bact?rias amilol?ticas dos ecossistemas aqu?ticos da Amaz?nia, sele??o de um bom produtor de alfa amilase, clonagem e express?o do gene da alfa amilase (Amy). Com o prop?sito de isolar as unidades formadoras de col?nias (UFC?s) e identificar a atividade enzim?tica amilol?tica qualitativa e quantitativa, al?m de, clonar o gene AMYKOR da alfa amilase e expressar em E. coli. A mostras de ?gua foram coletadas nos rios Negro, Solim?es e o Mamori, e posteriormente, foram identificados clones com a capacidade de hidrolisar amido. A seguir, foi extra?do do DNA total das bact?rias amilol?ticas para amplifica??o dos genes de RNA Ribossomal 16 S e do gene de alfa-amilase para identifica??o taxon?mica molecular. As an?lises das sequ?ncias mostraram ser Bacillus koreensis o isolado melhor produtor de alfaamilase. Subsequentemente, foi enviado para a s?ntese qu?mica a sequ?ncias do gene alfa amilase, que posteriormente, foi clonado e expresso em E. coli. O B. koreensis e o clone recombinante de E. coli produtores de alfa-amilase foram cultivados em 50 mL meio LB com agita??o a 30?C e 37?C respectivamente. A c?lulas foram retiradas por centrifuga??o a baixa velocidade e as enzimas dos sobrenadantes precipitadas com etanol 50%, recuperandose um total de 106 unidades de alfa amilase (recombinante) e 120 unidades de alfa amilase selvagem de Bacillus koreensis). Os resultados da caracteriza??o bioqu?mica mostraram que tanto a enzima natural como a recombinante apresentaram pH ?timo igual a 6 e temperatura ?tima de 60 ?C, para ambas as enzimas estudadas. Verificamos os par?metros da cin?tica enzim?tica aparente de Km de 4,8 mg/mL e a velocidade m?xima aparente de 2,6 mg-1 . mL- 1 . minuto-1 da alfa amilase recombinante, bem como, os par?metros da cin?tica enzim?tica aparentes de Km aparente de 4,0 mg/mL e a velocidade m?xima aparente de 2,3 mg-1 . mL-1 . minuto-1 da alfa amilase selvagem do Bacillus koreensis. Pode-se verificar que tanto a alfa amilase natural como a recombinante apresentaram temperaturas ?timas, pHs ?timos e par?metros cin?ticos similares. Esses par?metros indicam que a enzima tem potencial para uso industrial.", publisher = {Universidade Federal do Amazonas}, scholl = {Programa de P?s-Gradua??o em Biotecnologia}, note = {Instituto de Ci?ncias Biol?gicas} }