@PHDTHESIS{ 2012:51005272, title = {Constru??o de vetores de express?o para Escherichia coli baseados em promotores ativos na fase estacion?ria de crescimento}, year = {2012}, url = "http://tede.ufam.edu.br/handle/tede/3090", abstract = "Plasm?deos s?o elementos gen?ticos extracromossomais, que no geral n?o s?o essenciais para a sobreviv?ncia da bact?ria, entretanto, conferem vantagens peculiares (como resist?ncia ? antibi?ticos) para o organismo. Para engenharia gen?tica, plasm?deos de ocorr?ncia natural t?m sido modificados extensivamente para produ??o de vetores com as caracter?sticas desejadas. Promotores s?o elementos de um vetor que podem ter um profundo efeito na for?a e dura??o da transcri??o, e consequentemente, no rendimento proteico. A s?ntese de mRNA inicia quando a RNA polimerase se liga a sequ?ncia promotora , adjacente ao gene alvo. Fatores sigma s?o prote?nas que regulam a transcri??o em bact?rias, e os mesmos podem ser ativados em diferentes condi??es ambientais. O fator sigma (S) ? visto como um regulador mestre de resposta ao estresse geral, codificado a partir do gene RpoS na fase estacion?ria tardia. Este fator ? o regulador prim?rio dos genes de fase estacion?ria. Promotores baseados em reguladores metab?licos de fase estacion?ria representam uma classe de promotores controlados metabolicamente e que podem ser explorados para o design de vetores de express?o. Neste projeto foram desenvolvidos tr?s cassetes de express?o para a constru??o de vetores de express?o, os quais possuem promotores com afinidade pelo fator sigma S, com o objetivo de avaliar o perfil de express?o de prote?nas recombinantes em Escherichia coli. Para a avalia??o da for?a dos promotores e do perfil de express?o, utilizou-se a prote?na verde fluorescente (GFP) como gene rep?rter. Os tr?s vetores constru?dos, os quais foram denominados de p26, p53 e pFS expressaram a GFP com a correta forma??o do fluor?foro, sendo que os vetores p26 e p53 apresentaram superexpress?o da prote?na recombinante, quando comparados ao vetor pGS21a. Ademais, observou-se que os vetores aqui constru?dos est?o contribuindo para a redu??o da taxa de crescimento e filamenta??o da E. coli. Esta plasticidade morfol?gica confere ? bact?ria maior capacidade de armazenamento da prote?na recombinante expressa.", publisher = {Universidade Federal do Amazonas}, scholl = {Programa de P?s-Gradua??o em Biotecnologia}, note = {Instituto de Ci?ncias Biol?gicas} }