@MASTERSTHESIS{ 2010:202112761, title = {Sele??o de leveduras amaz?nicas capazes de metabolizar hidrolisado hemicelul?sico e fermentar D-xilose}, year = {2010}, url = "http://tede.ufam.edu.br/handle/tede/3610", abstract = "Foram isoladas leveduras a partir de diferentes habitats amaz?nicos, a saber, intestino de besouros da fam?lia Carabidae, conte?do abdominal de cupins (Nasutitermes sp.), amostras de solos coletados em ?reas de savanas (forma??o geomorfol?gica Boa Vista RR) e em matas de terra firme (Manaus AM). As leveduras foram isoladas segundo a capacidade de crescer invitro usando hidrolisado hemicelul?sico de cana-de-a??car (HACA) como fonte ?nica de carbono, sendo selecionadas aquelas que fossem capazes de assimilar e fermentar D-xilose. Para tanto se utilizou meio de cultura composto por hidrolisado hemicelul?sico de cana-de-a??car (concentra??o de a??car redutor total ajustada para 1%), suplementado por Yeast Nitrogen Base (YNB 6,7 g/L) e Agar (20 g/L). A capacidade de assimilar D-xilose foi atestada pela t?cnica replica-plating, descrita por Barnett et al. (1990), cultivando as col?nias isoladas em placas de Petri contendo D-xilose (50 mM), YNB (6,7 g/L) e Agar (20 g/L). A capacidade fermentativa foi testada em tubos de ensaio contendo meio YUKX l?quido, composto por extrato de leveduras (1,5 g/L), ur?ia (1,25 g/L), KH2PO4 (1,1 g/L) e D-xilose (50 g/L). Em cada tubo de ensaio foi adicionado um tubo de Durham para reten??o de g?s liberado pela fermenta??o. Outro teste qualitativo de fermenta??o foi efetuado, cultivando as leveduras em tubos Falcon? de 50 mL contendo 10 mL de YUKX. Os tubos foram vedados com rolhas de borracha contendo um orif?cio fechado por uma mangueira. Ap?s sete dias de cultivo, a mangueira foi aberta dentro de uma coluna de ?gua, para evidenciar o desprendimento de g?s pela atividade fermentativa. Foram isoladas ao todo 76 col?nias de leveduras, sendo duas associadas a solos de savana, oito associadas a solos de florestas de terra firme, 12 associadas a besouros da familia Carabidae e 54 associadas ? Nasutitermes sp. Dentre estas, 28 foram capazes de assimilar D-xilose e tr?s capazes de fermentar o referido a??car, sendo duas associadas ? Carabidae e uma a Nasutitermes sp. Estes resultados concordam com o que foi escrito anteriormente por Breznak (1982) e Blackwell (2004), os quais consideram que o trato digestivo de insetos xil?fagos ? uma rica fonte de microrganismos de interesse biotecnol?gico. As tr?s linhagens de leveduras, fermentadoras de D-xilose (LC27, IB04 e IB09) foram cultivadas em YUKX e em HACA, a fim de caracteriz?-las quanto ao crescimento celular (mensurando a densidade ?tica / ? = 600 nm) e o consumo de a??car redutor (quantificado pelo m?todo DNS). O ensaio em ferment?metro foi executado para avalia??o da perda de massa por desprendimento de CO2 a fim de se estimar a produtividade de etanol. Avaliou-se ainda a termotoler?ncia (choque t?rmico a 52 ?C por 9 minutos) e toler?ncia ao etanol (cultivo estacion?rio por 7 dias em YPD + 20% etanol). Todos os experimentos foram feitos em duplicata, com pH inicial 5,5 e temperatura a 35 ?C. O consumo de a??car redutor total em HACA foi em m?dia de 78,3%, enquanto que em YUKX o consumo m?dio foi de 55,9%. Quando cultivadas em HACA, as linhagens demonstraram ainda potencial de sacarifica??o, elevando a concentra??o de ART em at? 48% durante as primeiras 8 horas de cultivo. As linhagens IB04 e IB09 s?o termotolerantes, apresentando viabilidade celular superior a 85%, enquanto que LC27 esses valores foram inferiores a 40%. O teste de toler?ncia ao etanol demonstrou resist?ncia pelas tr?s linhagens, com m?dia de 81 unidades formadoras de col?nia nas primeiras 24 horas, tornando-se incont?veis a partir das 48 horas. A evolu??o de CO2 (valor m?dio de 3,2 g/L) permite estimar produ??o de etanol, mas com baixo rendimento, com estimativa de 3,34g/L. Todas apresentam potencial para utiliza??o em processos biotecnol?gicos usando hidrolisado hemicelul?sico como substrato.", publisher = {Universidade Federal do Amazonas}, scholl = {Programa de P?s-gradua??o em Diversidade Biol?gica}, note = {Instituto de Ci?ncias Biol?gicas} }