@PHDTHESIS{ 2017:597723138, title = {Detec??o de Escherichia coli enterotoxig?nica por anticorpos anti-EtpA ligados a nanopart?culas magn?ticas}, year = {2017}, url = "http://tede.ufam.edu.br/handle/tede/5798", abstract = "As doen?as diarreicas totalizam a segunda principal causa de morte em crian?as menores de cinco anos de idade, perdendo apenas para a pneumonia. A cada ano a diarreia mata cerca de 760.000 crian?as nessa faixa et?ria. A linhagem de E. coli enterotoxig?nica (ETEC) ? considerada como um dos agentes causadores mais frequentes da diarreia infantil e da diarreia dos viajantes nos pa?ses de baixa e m?dia renda. Dentre os fatores de virul?ncia secretados por ETEC, a exoprote?na EtpA foi descrita como uma importante prote?na que se interage com as regi?es altamente conservadas do flagelo bacteriano. Essas intera??es s?o cr?ticas para a ades?o, coloniza??o e entrega das toxinas nos enter?citos por ETEC. Foi desenvolvido no presente trabalho uma nova ferramenta de detec??o para a bact?ria E. coli enterotoxig?nica. Inicialmente foi determinado a melhor sequ?ncia antig?nica da prote?na quim?rica EtpA por ensaios de predi??o in silico. Ap?s a constru??o do ant?geno recombinante, avaliamos a produ??o de anticorpos policlonais anti-EtpA em camundongos que foram estimulados com esse ant?geno. O mapeamento de ep?topos utilizando pept?deos sint?ticos demonstrou que apenas o pept?deo 1.1 foi reativo ao pool de soros dos animais imunizados. O reconhecimento espec?fico dos anticorpos anti-EtpA foram avaliados por citometria de fluxo. Os resultados mostraram que o anticorpo desenvolvido foi capaz de reconhecer a prote?na EtpA nativa. A avalia??o da especificidade dos anticorpos anti-EtpA contra diferentes cepas de E. coli diarreiog?nicas demonstrou a maior porcentagem e especificidade para um isolado de ETEC (7.2%). Em seguida, os anticorpos foram acoplados em beads magn?ticas para a captura e detec??o de isolados de ETEC. Os resultados por citometria evidenciaram alta sensibilidade, especificidade e a efic?cia do m?todo de separa??o e detec??o desses pat?genos por beads magn?ticas ligadas aos anticorpos anti-EtpA.", publisher = {Universidade Federal do Amazonas}, scholl = {Programa de P?s-Gradua??o em Biotecnologia}, note = {Instituto de Ci?ncias Biol?gicas} }