Universidade Federal do Amazonas

1. TEDE
2. Unidade Manaus
3. Programa de Pós-Graduação em Biotecnologia
4. Mestrado em Biotecnologia

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???metadata.dc.type???:	Dissertação
Title:	Diagnóstico molecular para malária por nestedpcr e pcr em tempo real.
???metadata.dc.creator???:	Hipólito, Janayna Roriz
???metadata.dc.contributor.advisor1???:	Alecrim, Maria das Graças Costa
???metadata.dc.description.resumo???:	A malária é um problema de saúde pública na região Amazônica, mais de 200 mil casos dessa doença ocorrem anualmente no Amazonas, sendo 80% deles causados pelo P. vivax, que vem apresentando índices crescentes de morbidade, principalmente associados à diminuição da sensibilidade aos antimaláricos. Dentre as estratégias para combate e controle da doença, a identificação rápida e precisa da espécie é ferramenta indispensável para um tratamento apropriado, diminuição do risco de transmissão e melhor entendimento da epidemiologia desses parasitas. A técnica microscópica da gota espessa é a principal para diagnóstico da malária, entretanto, outros métodos vêm sendo testados, principalmente os moleculares que tem se mostrado mais sensíveis e específicos para detectar e diferenciar as espécies em baixas parasitemias. Avanços desse método, como a PCR em tempo real, permitem que o resultado do teste seja detectado simultaneamente a amplificação, diminuindo o tempo gasto para a realização do diagnóstico. Com o intuito de detectar molecularmente a malária, verificando a presença de plasmódios, o diagnóstico molecular foi realizado através das técnicas de PCR em tempo real e nested-PCR, para se fazer uma comparação desses dois métodos com o diagnóstico microscópico da gota espessa em 300 amostras criopreservadas, 200 coletadas no dia inicial do tratamento (D0), das quais 88% (176/200) eram provenientes de pacientes de Manaus, as 24 amostras restantes (12%) eram provenientes de localidades do interior do Amazonas: São Gabriel da Cachoeira (09), Tefé (08), Humaitá (04) e Careiro (03). Apenas 9% dessas amostras tinham diagnóstico microscópico de monoinfecção por P. falciparum e 91% (182/200) por P. vivax, não havia nenhuma amostra mista pelo diagnóstico microscópico. O diagnóstico molecular por nested-PCR confirmou a presença de DNA de plasmódio em 100% das amostras monoinfectadas. Adicionalmente, foram observadas infecções mistas, co-infecção de P. falciparum e P. vivax, em 19% (38/200) destas amostras. O diagnóstico molecular por PCR em tempo real (Lightcycler, Roche®) foi realizado em apenas 17% (34/200) dessas amostras. A co-positividade (sensibilidade) dos testes para P. vivax foi em média 71% e a co-negatividade (especificidade) 92%, para P. falciparum a co-positividade foi 91% e a conegatividade 79%. A concordância entre os testes foi regular. As 100 amostras restantes haviam sido coletadas no sétimo dia (D7) de tratamento e eram negativas pela microscopia. O diagnóstico molecular demonstrou 21% de positividade. Este estudo mostrou que muitas infecções mistas vêm sendo subestimadas para fins de avaliação epidemiológica, demonstrando que a sensibilidade e especificidade do diagnóstico molecular são superiores a do teste microscópico. O diagnóstico molecular seria então mais indicado como teste complementar no diagnóstico de pacientes com baixas parasitemias, na análise da quantidade de portadores assintomáticos, em estudo de infecções criptônicas e na avaliação da negativação da parasitemia para monitoramento terapêutico, e em estudos que visem a diminuição da transmissão pela existência de prováveis gametócitos persistentes após o tratamento. Entretanto, esse método não é indicado para rotina de diagnóstico de malária, uma vez que os resultados positivos por essa técnica não significam necessariamente que o paciente desenvolva a doença.
Keywords:	Malária, Diagnóstico, Nested-PCR, PCR em tempo real. Malaria, Diagnosis, Nested-PCR, real time PCR.
???metadata.dc.subject.cnpq???:	CIÊNCIAS BIOLÓGICAS
Language:	por
???metadata.dc.publisher.country???:	BR
Publisher:	Universidade Federal do Amazonas
???metadata.dc.publisher.initials???:	UFAM
???metadata.dc.publisher.department???:	Instituto de Ciências Biológicas
???metadata.dc.publisher.program???:	Programa de Pós-Graduação em Biotecnologia
Citation:	HIPÓLITO, Janayna Roriz. Diagnóstico molecular para malária por nestedpcr e pcr em tempo real.. 2006. 93 f. Dissertação (Mestrado em Biotecnologia) - Universidade Federal do Amazonas, Manaus, 2006.
???metadata.dc.rights???:	Acesso Aberto
URI:	http://tede.ufam.edu.br/handle/tede/2242
Issue Date:	28-Jul-2006
Appears in Collections:	Mestrado em Biotecnologia

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